猪瘟病毒(CSFV-Ag)抗原ELISA检测试剂盒

192样

一、产品类型：

检测抗猪瘟病毒抗原的双夹心ELISA试剂盒

二、介绍：

瘟病毒属是黄病毒科的成员，对于不同种属家畜感染不同的病原，包括猪瘟病毒（CSFV）,牛病毒性腹泻病毒（BVDV），以及羊边界病病毒（BDV）。猪瘟病毒引起猪只的高传染性、通常是致死性的疾病，临床上以发热和出血为特征，有急性或慢性表现形式。

瘟病毒是一种单股RNA病毒，编码一个单一的多聚蛋白。三种囊膜糖蛋白E0、E1、E2（gp55）按顺序排列在多糖蛋白上。中和病毒感染性的抗体直接作用于位于E2糖蛋白上的抗原决定位点。

猪瘟病毒抗原ELISA检测试剂盒是利用抗E2糖蛋白单克隆抗体建立起来的一种双夹心ELISA检测方法。用于检测和筛选血液、组织以及培养细胞等样品中的E2抗原。

三、试验原理：

抗E2(gp55)糖蛋白的单克隆抗体包被在酶标板上，从白细胞、同源组织或血浆中提取和稀释的样品被加到酶标板的各个孔中，如果样品中存在E2(gp55)糖蛋白，那么在加入辣根过氧化物酶结合的抗E2糖蛋白单克隆抗体以及显色底物后，颜色将会加深。样品的OD值同阳性对照比较后得到样品中抗体的结果（S/P值）。

四、特点：

猪瘟病毒抗原ELISA检测试剂盒是用来检测猪白细胞、同源组织（扁桃体、淋巴结、脾脏等）样品中E2（gp55）糖蛋白，是一种快速、简单、特异的方法。

猪瘟病毒抗原ELISA同病毒分离试验以及RT-PCR有非常好的相关性。

猪瘟病毒抗原ELISA检测试剂盒只适用于病毒滴度在10³TCID₅₀/ml左右样品的检测。

五、试剂盒内容：

1、抗E2(gp55)单克隆抗体包被板          2块         

2、10倍样品处理液 （STB）              30毫升

3、稀释液                               50毫升      

4、10倍洗液浓缩液                      100毫升

5、全血处理液（WTB）                    100毫升

6、酶标抗体                             20毫升      

7、显色底物                           20毫升

8、终止液                             10毫升      

9、强阳性对照                         1毫升

10、弱阳性对照                        1毫升       

11、阴性对照                          1毫升

12、操作手册                          1份

六、组织样品处理：

组织样品应收集猪只得脾脏、扁桃体、肺、脑组织、肾以及肠系膜淋巴结，最好是脾脏和扁桃体。

1、 将组织剪成1-2克的碎片；

2、 捣碎，并加入3-5毫升样品处理液；

3、 室温下轻轻搅拌，孵育1小时；

4、 12000转离心1分钟（或1500转离心10分钟），取上清检测。

七、白细胞收集：

淋巴细胞梯度离心分离白细胞

1、采集抗凝血3毫升（肝素或EDTA均可），置入离心管；

2、1000转离心10分钟，用移液器收集白细胞层1毫升，与0.5毫升PBS缓冲液混合；

3、12000转离心1分钟，弃除上清；

4、加入300ul样品处理液混合，室温下轻轻搅拌，孵育1小时；

5、 12000转离心1分钟（或1500转离心10分钟），取上清检测。

八、全血处理：

全血可以用来检测，但不如白细胞检测敏感，如果全血检测呈阳性，应进一步通过白细胞或组织样品检测来确定。

1、 采集的全血样品不能有凝集现象，如果有血块等凝集现象，应该重新采样；

2、 全血和全血样品处理液（WTB）等量混合，室温孵育10分钟；

3、 12000转离心3-5分钟（或1500转离心10分钟），弃除上清

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