BioChek 传染性支气管炎（IBV）抗体检测试剂盒

产品代码 CK119

传染性支气管炎（IBV） ELISA 检测试剂盒，可以从鸡的血液样品中检测IBV抗体的数量。微量板用已灭活的IBV 抗原包被，将稀释的鸡的血清样品加入到微量孔中，样品中抗IBV抗体将与包被的抗原形成抗原抗体复合物。非特异性的抗体和其它的血清蛋白被洗去。用碱性磷酸酶标记的抗鸡IgG 抗体加到孔中，与抗原抗体复合物结合，然后再洗去未反应的结合物。PNPP显色剂作为底物被加入，如果抗IBV 抗体存在，则显黄色。颜色强度直接与样品中的抗IBV 抗体的数量有关系。

提供的试剂

IBV包被板（Coated plates）：包被有灭活病毒抗原的微量板。

酶标二抗 (Conjugate reagent) :碱性磷酸酶标记的抗鸡抗体：内含蛋白稳定剂和叠氮化钠防腐剂（0.1% 重量/体积）及红色染料的磷酸盐缓冲液。

底物片(Substrate tablets) PNPP（4-硝基苯磷酸二钠盐）：用底物缓冲液溶解后使用。

底物缓冲液(Substrate buffer):含有与酶反应相关物质的二乙醇胺缓冲液。

终止液(Stop Solution):含有NaOH的二乙醇胺缓冲液。

样品稀释液(Sample Diluent):含有蛋白稳定剂和叠氮化钠（0.1% 重量/体积）的磷酸盐缓冲液。

洗液(Wash Buffer):含有吐温的磷酸盐缓冲液（粉）。

阴性对照(Negative Control):含SPF鸡血清的磷酸盐缓冲液：内含有蛋白稳定剂和叠氮化钠防腐剂（0.1% 重量/体积）及蓝色染料。

阳性对照(Positive Control):含特异性IBV抗体的磷酸盐缓冲液：内含有蛋白稳定剂和叠氮化钠防腐剂（0.1% 重量/体积）及红色染料。

材料和设备要求（试剂盒未提供）

精确的微量移液器和一次性吸头

8或12孔道的微量移液器

稀释样品的塑料管

蒸馏水或去离子水

含405nm波长的酶标仪

注意事项

1．处理各种试剂要小心。终止液中含有腐蚀性的强碱，如果溅到皮肤或眼中，用大量的清水洗涤。

2．把各种生物材料都看成具有潜在的生物危险性物，包括所有的外来样品。在销毁之前，要用漂白粉或其它强氧化剂，将用过的反应板和废弃液进行消毒。

3．不要用嘴碰移液器。在使用试剂盒中的试剂和处理样品的地方，不要吃东西，喝水或吸烟。

4．试剂盒仅供体外使用。

5．严格按照检测规程操作才能取得最好的结果。

试剂的准备

1．底物试剂：取1片底物放入洁净容器中，加入5.5-6ml的底物缓冲溶液，混合直到完全溶解。本试剂最好是现用现配，配置好的底物溶液可以在+4℃下避光保存1周。请勿用手直接触拿底物片。

2．洗液：将1袋洗液完全倒入1升蒸馏水或去离子水中，混合使其完全溶解。洗液可在+4℃保存1个月。

3．试剂盒中的其它成分可以直接使用，使用前要回温至室温（22-27℃）。

样品的准备

每个样品按照1:500稀释，即1μl样品加0.5ml的样品稀释液。

1．用旋涡混合器或振荡器混合均匀。

2．每份样品都要换一个未用过的新吸头。

3．稀释管清晰地标有样品号。

试剂盒中的阳性和阴性对照不要稀释！

操作步骤

1．从密封袋中取出用IBV 包被的反应板，在记录纸上记录样品的位置。

2．在A1 和B1 孔中加入100μl 的阴性对照。

3．在C1 和D1 孔中加入100μl 的阳性对照。

4．加100μl 稀释好的样品到相应的板孔中，用盖子盖住反应板，在室温（22-27℃）下孵育30分钟。

5．倒出孔中的内容物，用洗液洗4 次(每孔300μl)。最后一次倒转反应板，在吸水纸上轻轻拍打。

6．各孔加100μl酶标二抗，用盖子盖住反应板，在室温（22-27℃）下孵育30分钟。

7．重复步骤5。

8．各孔加100μl底物试剂，用盖子盖住反应板，在室温（22-27℃）下孵育15分钟。

9．各孔加100μl 终止液，终止反应。

10．空气调零，以405nm 的波长于酶标仪测定各孔的吸光度。

结果

为确保试验有效，阴性对照的平均吸光度应该小于0.3，阳性对照的平均值和阴性对照的平均值之差应大于0.15。

实验室的温度不同，所得到的结果会有误差。根据实验对照的结果判定实验的有效性。阳性对照是标准化的试剂，它代表IBV 抗体的含量。样品中抗体的含量可以通过阳性对照来计算。用S/P 值（样品与阳性对照的比值）来表示抗体。

结果判定

1．S/P值的计算

样品的S/P值大于等于0.2 判为阳性。

2．抗体滴度的计算

Log₁₀效价＝1.1×LogS/P + 3.62

逆对数＝效价

3．判定标准

S/P值 效价范围 抗体状况

≤0.199 ≤833 阴性

≥0.200 ≥834 阳性