CIVTEST SUIS HC/PPC

猪瘟抗体检测试剂盒

本试剂盒利用竞争ELISA 的方法诊断和检测猪瘟抗体

检测原理

猪瘟抗体检测试剂盒（CIVTEST SUIS HC/PPC）是利用竞争ELISA 方法建立的。特异的猪瘟病毒被包被在96 孔板上。在反应过程中，检测样本被加入反应孔中，样本中的特异性抗体会与孔中包被的特异性抗原反应，然后添加兔抗猪瘟抗体，它只能和那些血清内没有猪瘟抗体的反应孔包被的猪瘟抗原反应。反应30 分钟后，进行洗板，洗去那些没有结合的物质（在这个过程中，那些样本中含有猪瘟抗体的，兔抗猪瘟抗体将会被洗掉）。第三步添加标记酶的抗兔的LgG，这些酶标复合物就会与兔的抗体发生反应。没有结合的酶标复合物在洗板的过程中被清洗。在加入对氧化酶敏感的可以显色底物。显色的颜色深浅与样本所含猪瘟病毒的抗体浓度成反比。

试剂盒组成

包被猪瘟抗原的96孔板. 5

Vial Nº0: 洗液 (x10). 250 ml

Vial Nº1: 免疫猪瘟抗体，可以直接使用 30 ml

Vial Nº2:酶标复合物:红色的标记HRPO的抗猪LgG抗体. 可直接使用 30 ml

Vial Nº3: 底物:ABTS. 可直接使用。 30 ml

Vial Nº4: 底物终止液: 稀草酸. 可直接使用. 30 ml

Vial Nº5: 阳性对照: 阳性血清. 可直接使用. 2 ml

Vial Nº6: 阴性对照: 阴性血清. 可直接使用. 2 ml

覆盖膜 5

说明书 1

质检证书. 1

用前准备：

仔细阅读说明书，所有试剂在2-8℃条件下保存。不用时，所有的板条一定要用用封口膜密封，并存放在封口的塑料小袋中，防止潮气对包被板的损伤。尽管在生产过程中，包被的抗原已经被灭活，但包被的抗原仍被视为病毒的潜在来源。不要使底物接触强光和氧化物。ABTS是一种敏感度很高的底物，取出后，不得再加回瓶中，试剂瓶中已多备了25%的试剂，完全够用。不要使用过期的成分或者不同批次试剂混合使用成分。注意加样和冲洗，以确保试验的精确度和准确度。不能用嘴吸液。操作过程中使用手套，终止液是一种有机酸，具有腐蚀性，使用时要小心。所有的废液要经过处理和净化。本品为兽用产品。

如果正确保存，没有打开的试剂，在到达标签指示的有效期时，也是很稳定的。

检测过程

A、试剂的准备：

所有的试剂在使用前，必须回温到室温。

洗液（10X）： 取1 份清洗液加入9 份的灭菌水或去离子水中（如要配200ul 的稀释液清洗液，可取20ul 的浓缩液加入180ul 的灭菌水或去离子水）。配好的液体，我们推荐在7 天内用完。

注意：清洗液由于盐分高可能结晶，使用前必须摇匀溶解。需要整瓶试剂，可以利用反复颠倒混匀溶解。如果使用部分试剂，需要在室温或者在28-37℃水浴条件下10-15 分钟，将结晶溶解后，再配稀释液。为了避免形成结晶，清洗液可保存在到室温条件下。

B，样本的准备

直接添加50ul 的样本，阳性对照和阴性对照也不需要稀释直接添加50ul。.

C．操作步骤：

A，将试剂放在室温，并轻摇或者倒置混匀

B，将样本和对照加入板孔中。阳性对照和阴性对照必须是双份。

1，加入50ul 阳性和阴性对照，及样品在反应板孔.。

2, 盖上膜,在37℃作用120 分钟（或4℃过夜孵育16 个小时）

37℃孵育可作为筛选用，若阻断率在30-40%时，可用4℃过夜孵育的方法来重新确认样品的结果。

3, 去膜，不用除去对照和样本直接加入50ul 的兔抗猪瘟抗体，轻轻混匀孔中的液体。

4, 盖上膜,在37℃作用30 分钟

5, 去膜,用300ul 的洗液洗3 遍,并在吸水纸上将平板弄干(颠倒,在纸上轻敲),

6, 在每个孔中加入50ul 酶标抗体

7, 盖上膜,在37℃作用30 分钟

8, 去膜,用300ul 的洗液洗3 遍,并在吸水纸上将平板弄干(颠倒,在纸上轻敲),

9, 加入50ul 的底物,轻摇板2 秒

10，将平板放在黑暗中在20-25℃ 作用30 分钟

11, 加入50ul 的终止液,轻敲平板混匀

12,用柔软的东西轻拭平板上的脏物,在405nm 下读数并记录结果

结果的计算

可行的结果的条件：

阳性对照阻断值>70%，阴性对照平均值/阳性对照平均值 在4-8之间。

用INH%来说明检测的结果,以下是它的计算方式

INH%= [（阴性对照值—样品的OD 值）/（阴性对照）]X100

结果说明：